Zeiss Axioplan auf Fluoreszenz aufrüsten

Hallo Bernd,

Sehr gern - obwohl ich das Mikroskop ja vor mir habe, kennst du dich anscheinend trotzdem besser aus

Zitat von Nomarski

Man erkennt nun die Ringförmige Blechfeder am Beleuchtungsstutzen. Nimmt man diese vorsichtig heraus, lassen sich die Filter entnehmen bzw. fallen dann entgegen.

Korrekt - das hab ich dann (mit deinem Hinweis) auch gesehen, danke.

Zitat von Nomarski

Diese Schächte neben den für den BG38-Schieber sind für Zusatz-Anregungsfilter. Aber eigentlich sind diese bereits in dem Filterblock enthalten, es sei denn, die Anregung soll etwas schmalbandiger werden für bestimmte Zwecke.

Ich behalte mir das auf jeden Fall im Hinterkopf, falls ich mich mit Interferenzen verschiedener Wellenlängen konfrontiert sehe, die meine Fluoreszenzaufnahmen beeinträchtigen - gut zu wissen.

Zitat von Nomarski

Nun ist dein Stativ halt mit 446450 ausgestattet. Interessant wäre der Vergleich zum 446460 bezüglich den optischen Komponenten.

Damit kann ich leider nicht dienen, vielleicht findet sich jedoch bald ein/e andere/r Interessierte/r Beitragleser/in, der/die mit der Beleuchtungseinheit 44 64 60 ausgestattet ist.

Mit freundlichen Grüßen,

Maxi

Liebes Mikroskopie-Forum,

Hallo Bernd,

Ich konnte nun erfolgreich mein Zeiss Axioplan Mikroskop auf Fluoreszenz umrüsten.

Zuerst habe ich mir den 3Fl Schieber (44 64 21) besorgt. In den Schieber habe ich mir vom Verkäufer schon gleich den Filtersatz 49 auf Pos I einsetzen lassen.

Zeiss Filtersatz 49: für DAPI, Hoechst

• Anregung: G 365
• Strahlteiler: FT 395
• Emission: BP 445/50

3Fl Schieber (44 64 21) von oben:

3Fl Schieber (44 64 21) seitlich:

Daraufhin habe ich mir weitere Filtersätze besorgt: Filtersatz 23 und Filtersatz 15.

Zeiss Filtersatz 23: für Alexa 488, MitoTracker Green, Propiumiodid, Rhodamin

• Anregung: DBP 485/20 + 546/12
• Strahlteiler: DFT 500 + 560
• Emission: DBP 515-530 + 580

Zeiss Filtersatz 15: für Propiumiodid

• Anregung: BP 546/12
• Strahlteiler: FT 580
• Emission: LP 590

Zum Eindrehen des Filtersatzes in den 3Fl Schieber (44 64 21) ist ein spezieller Schlüssel erforderlich, den hab ich mir gleich dazu gekauft (silberner, viereckiger Schlüssel im Bild). Dieser Schlüssel greift in die Einkerbungen der Ringschraube der Filtergläser ein, um diese festzudrehen.

Der Einbau dieses Filtersatzes ging dann ziemlich einfach.
Zuerst werden die Schrauben der oberen Platte vom 3Fl Schieber (44 64 21) mittels Schlitzschraubendreher entfernt:

Danach werden mit dem passenden Inbusschlüssel die Halterungen für die dichroitischen Spiegel gelöst.

Beim Einsetzen der dichroitischen Spiegel ist darauf zu achten, dass die beschichtete Seite nach oben zeigt (also mich anschaut, so wie der Schieber im Bild da liegt). Die beschichtete Seite ist durch die Färbung recht schwer erkennbar, bei mir stand "oben" und "unten" bzw. "coated" zum Glück auf der Verpackung. Der Spiegel wird in die dafür vorgesehene Halterung eingelegt. Dort ist darauf zu achten, dass die Kanten den Spiegel festhalten (im Bild wird zwar ein Filterwürfel gezeigt, der nicht im 3Fl Schieber verbaut ist, jedoch ist das Prinzip das gleiche, man sieht es beim Filterwürfel nur besser). Danach werden die Inbusschrauben einfach wieder aufgeschraubt (s. vorheriges Bild).

Der dichroitische Spiegel wird einmal für den Filtersatz 23 und einmal für den Filtersatz 15 eingesetzt und festmontiert.

Danach sind die Filtergläser einzusetzen. Hierauf ist darauf zu achten, welche Gläser für die Anregung und welche für die Emission zu verwenden sind, einfach den Strahlengang im Mikroskop verfolgen und die jeweiligen Gläser an die richtige Position setzen.

Zum Einsetzen der Filtergläser werden zuerst die Ringschrauben mit dem speziellen Schlüssel gelöst. Der Schlüssel (silber) passt in die Einkerbungen (hellblau markiert) an den Ringschrauben und dreht die Schrauben heraus. Danach können die Filtergläser (gelb umrahmt) eingelegt werden. Nun einfach die Ringschrauben wieder drauf schrauben. Dabei sollte man die Schrauben nicht zu fest ziehen, um ein Splittern der Filtergläser zu vermeiden. Auch beim Einsetzen Filtergläser muss man die Richtung beachten, wie im Bild oben ersichtlich stand das zum Glück auf der Verpackung drauf.

Und fertig ist der 3Fl Schieber (44 64 21) mit

• Filtersatz 49 auf Pos I (Anregung: 365, Strahlteiler: 395, Emission: 445/50) für DAPI, Hoechst
• Filtersatz 23 auf Pos II (Anregung: 485/20 + 546/12, Strahlteiler: 500 + 560, Emission: 515-530 + 580) für Alexa 488, MitoTracker Green, Propiumiodid, Rhodamin
• Filtersatz 15 auf Pos III (Anregung: 546, Strahlteiler: 580, Emission: 590) für Propiumiodid

Während des gesamten Einbaus habe ich Baumwoll- und Latexhandschuhe getragen, denn die Filtergläser sollten keinesfalls mit den blanken Händen berührt werden. Zum Entfernen von kleinen Staubpartikeln und Co. habe ich ölfreies Druckluftspray verwendet.

Meinen herzlichen Dank für die interessanten Diskussionsbeiträge und hilfreichen Tipps gilt natürlich Bernd (Nomarski). Hat wirklich sehr viel Spaß gemacht, das zusammen zu bauen. Ich hoffe, in den nächsten Wochen die ersten Fluoreszenzbilder aufnehmen zu können.

Mit freundlichen Grüßen,

Maxi

Guten Morgen Bernd,

Zitat von Nomarski

Richtig, die Gläser dürfen auf keine Fall unter Spannung sein und beim Schütteln des ganzen Schiebers sogar noch leicht klappern. [...]

Deswegen immer etwas anziehen und dabei prüfen, ob das Glas noch Luft hat zum Bewegen.

Das ist wirklich gut zu wissen, denn einer der Filtergläser saß von Anfang an tatsächlich etwas lockerer in der Halterung und ich war mir nicht sicher, ob das so sein soll oder nicht - danke für die Klarstellung.

Hier noch ein paar weitere nützliche Tipps:

• die verwendeten Filtergläser für den 3Fl Schieber (44 64 21) haben einen 25 mm Durchmesser.
  Vorsicht: es gibt auch Filtersätze/Filtergläser mit anderen Durchmessern (z.B. 30 mm, 49 mm, usw.).
  Ich hab die Verkäufer vor dem Filtersatzkauf gleich gefragt, um welchen Durchmesser es sich handelt, wenn es nicht in der Beschreibung aufgelistet wurde.
• die Ringschrauben können falsch herum eingesetzt werden. Es gibt eine Seite mit flacher Abrundung und eine ohne.
• hilfreiches Video zu wie man einen Mikroskopfiltersatz wechselt (dort wird u.a. auch darauf hingewiesen, wie rum man die Filtergläser einsetzt. Bei neueren Filtersätzen, die nicht einfach nur runde Gläser sind, ist das auf dem Seitengrad abgedruckt. Der abgedruckte Pfeil auf dem Seitenrand ist dem Strahlengang des Lichts zu folgen).
• Websites, die Gebrauchtzubehörteile (wie z.B. Filtersätze) für Mikroskope verkaufen:
  eBay, ricardo, Optik-Online-Woitzik, Optische Systeme Jülich, Thilo-Immel-Optics, Optische Systeme Jülich-Bonn.
  Wie immer gilt: bei Fragen fragen!
  Die Leute sind sehr hilfsbereit und ich hab dort einfach angerufen oder gemailt, wenn etwas unklar war und explizit nachgefragt und wurde immer (wenn möglich) gut beraten.

Mit freundlichen Grüßen,

Maxi